一、微生物發(fā)酵法（主流工業(yè)化方法）

1. 大腸桿菌發(fā)酵法

• 工藝流程：以食品級(jí)葡萄糖和玉米漿為原料，經(jīng)大腸埃希氏菌（菌株號(hào)SA-8）發(fā)酵、過(guò)濾、滅菌、水解、提純等步驟制成。

2. 枯草芽孢桿菌基因工程法

• 工藝特點(diǎn)：利用基因工程改造的枯草芽孢桿菌工程菌株發(fā)酵，產(chǎn)量達(dá)9.7g/L（3L發(fā)酵罐）。

二、化學(xué)合成法

1. 傳統(tǒng)化學(xué)合成

• 工藝流程：通過(guò)多步化學(xué)反應(yīng)合成NANA，但需繁瑣的基團(tuán)保護(hù)與去保護(hù)操作，且易產(chǎn)生手性異構(gòu)副產(chǎn)物。

2. 微波水解法

• 工藝流程：以聚唾液酸為原料，用硫酸和磷酸混合酸液在微波反應(yīng)器中水解（如70℃、24min），經(jīng)超濾、蒸發(fā)結(jié)晶等步驟得到NANA。

三、酶催化轉(zhuǎn)化法

1. 全細(xì)胞生物催化

• 工藝流程：利用重組大腸桿菌表達(dá)N-乙酰葡萄糖胺-2-表異構(gòu)酶等，將N-乙酰葡萄糖胺和丙酮酸轉(zhuǎn)化為NANA。

2. “一釜五酶法"

• 工藝創(chuàng)新：以氨基葡萄糖為起始底物，通過(guò)五種酶催化合成唾液酸及其類(lèi)似物，延伸了生物全酶法生產(chǎn)通路。

四、天然產(chǎn)物提取法

1. 雞蛋殼膜提取

• 工藝流程：以雞蛋殼膜為原料，用硫酸水解（0.05mol/L、80℃、2h），經(jīng)乙醇沉淀、離子交換層析純化得到NANA。

2. 燕窩提取

• 工藝特點(diǎn)：燕窩中NANA含量豐富，但組分復(fù)雜，提取需結(jié)合酸、堿或酶法。

五、其他創(chuàng)新方法

1. 聚唾液酸發(fā)酵水解法

• 工藝流程：通過(guò)發(fā)酵生產(chǎn)聚唾液酸，再經(jīng)水解得到NANA。

2. 結(jié)晶純化法

• 工藝特點(diǎn)：通過(guò)溶解、調(diào)節(jié)pH、降溫結(jié)晶、過(guò)濾洗滌等步驟（如重復(fù)兩次結(jié)晶），可得到純度>99%的NANA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

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